Jauns koronavīrusa (SARS-Cov-2) nukleīnskābes noteikšanas komplekts
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flurūdascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Jauns koronavīrusa (SARS-Cov-2) nukleīnskābju noteikšanas komplekts (fluorescējošās RT-PCR zondes metode)
【Packaging specifications 】25 testi/komplekts
【Intended usvecums】
Šis komplekts tiek izmantots, lai kvalitatīvi noteiktu nukleīnskābi no jauna koronavīrusa nazofaringeālajos uztriepes, mutes un rīkles (rīkles) uztriepes, priekšējās deguna uztriepes, vidējās turbīnas uztriepes, deguna skalošanas līdzekļos un deguna aspirātos no personām, kurām ir aizdomas par COVID19. Jaunā koronavīrusa ORF1ab un N gēnu noteikšanu var izmantot jaunās koronavīrusa infekcijas papildu diagnostikai un epidemioloģiskai uzraudzībai.
【Principles of the proksdure 】
Šis komplekts ir paredzēts specifiskām TaqMan zondēm un specifiskiem primeriem, kas paredzēti jaunā koronavīrusa (SARS-Cov-2) ORF1ab un N gēnu sekvencēm. PCR reakcijas šķīdums satur 3 specifisku praimeru un fluorescējošu zondu komplektus specifiskai mērķu noteikšanai, un papildu specifisku praimeru un fluorescējošu zondu komplekts tiek izmantots kā komplekta iekšējā standarta kontrole endogēno mājturības gēnu noteikšanai.
Testa princips ir tāds, ka specifiskā fluorescējošā zonde tiek sagremota un noārdīta ar Taq enzīma eksonukleāzes aktivitāti PCR reakcijā, lai reportiera fluorescējošā grupa un dzēstā fluorescējošā grupa tiktu atdalītas, lai fluorescences uzraudzības sistēma varētu saņemt fluorescējošu signālu. signāls, un pēc tam, pateicoties PCR pastiprināšanas efektam, zondes fluorescences signāls sasniedz iestatīto sliekšņa vērtību-Ct vērtību (cikla slieksnis). Ja nav mērķa amplikona, zondes reportieru grupa ir tuvu slāpēšanas grupai. Šajā laikā notiek fluorescences rezonanses enerģijas pārnešana, un reportieru grupas fluorescenci dzēš dzēšanas grupa, tāpēc fluorescējošo signālu nevar noteikt ar fluorescējošu PCR instrumentu.
Lai pārraudzītu reaģentu lietošanu testa laikā, komplekts ir aprīkots ar pozitīvajām un negatīvajām kontrolēm: pozitīvā kontrole satur mērķa vietas rekombinanto plazmīdu, bet negatīvā kontrole ir destilēts ūdens, ko izmanto vides piesārņojuma uzraudzībai. Testēšanas laikā ieteicams iestatīt pozitīvo un negatīvo kontroli vienlaikus.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Komponents | |
| Name | Specifikāciju | Kvantīpašība | Kvantīpašība | |
| Pozitīva kontrole | 180 μL/flakons | 1 | 1 | Mākslīgi konstruētas plazmīdas, destilēts ūdens |
| Negatīvā kontrole | 180 μL/flakons | 1 | 1 | Destilēts ūdens |
| SARS-Cov-2 maisījums | 358,5 μL/flakonā | 1 | / | Specifiski praimeru pāri, specifiskas noteikšanas fluorescējošās zondes, dNTP, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilēts ūdens utt. |
| Enzīmu maisījums | 16,5 μL/flakonā | 1 | / | Taq enzīmi, reversā transkriptāze, UNG enzīmi utt. |
| SARS-Cov-2 maisījums (liofilizēts) | 25 testi/flakons | / | 1 | Specifiski praimeru pāri, specifiskas noteikšanas fluorescējošas zondes, dNTP, Taq fermenti, reversā transkriptāze, destilēts ūdens utt. |
| 2x buferis | 375 μL/flakons | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilēts ūdens utt. |
Piezīme：(1) Dažādu partiju komplektu sastāvdaļas nevar sajaukt vai apmainīt.
(2) Sagatavojiet savu reaģentu: nukleīnskābes ekstrakcijas komplektu.
【Storage conditions un expiration date 】
For BST-SARS-25:Transportēt un ilgstoši uzglabāt -20±5℃.
For BST-SARS-DR-25:Transportēšana istabas temperatūrā. Uzglabāt -20±5℃ ilgu laiku.
Izvairieties no atkārtotiem sasaldēšanas-atkausēšanas cikliem. Derīguma termiņš provizoriski noteikts 12 mēneši.
Ražošanas un lietošanas datumu skatiet etiķetē.
Pēc pirmās atvēršanas reaģentu var uzglabāt -20±5 °C temperatūrā ne ilgāk kā 1 mēnesi vai līdz reaģenta perioda beigām atkarībā no tā, kurš datums iestājas pirmais, lai izvairītos no atkārtotiem sasaldēšanas-atkausēšanas cikliem un reaģenta sasalšanas reižu skaita. -atkausēšanas cikli nedrīkst pārsniegt 6 reizes.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Piemērojamais parauga veids: Ekstrahēts nukleīnskābes šķīdums.
2. Paraugu uzglabāšana un transportēšana: Uzglabāt -20±5 ℃ 6 mēnešus. Paraugus sasaldēt un atkausēt ne vairāk kā 6 reizes.
【Testing method】
1.Nucleic acid extraction
Izvēlieties piemērotu nukleīnskābju ekstrakcijas komplektu, lai iegūtu vīrusu nukleīnskābi, un izpildiet atbilstošā komplekta norādījumus. Ieteicams izmantot Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. ražotu nukleīnskābju ekstrakcijas un attīrīšanas komplektu vai līdzvērtīgu nukleīnskābju attīrīšanas komplektu.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Noņemiet SARS-Cov-2 maisījumu un enzīmu maisījumu, pilnībā izkausējiet istabas temperatūrā, rūpīgi samaisiet ar Vortex ierīci un pēc tam īsi centrifugējiet.
(2) 16,5 uL enzīmu maisījumu pievienoja 358,5 ul SARS-Cov-2 maisījumam un rūpīgi samaisa, lai iegūtu jaukto reakcijas šķīdumu.
(3) Sagatavojiet tīru 0,2 ml PCR oktālo mēģeni un atzīmējiet to ar 15 uL iepriekš minētā jauktā reakcijas šķīduma katrā iedobē.
(4) Pievienojiet 15 μL attīrīta nukleīnskābes šķīduma, pozitīvo un negatīvo kontroli un uzmanīgi nosedziet oktālās mēģenes vāciņu.
(5) Labi samaisiet, apgriežot otrādi, un ātri centrifugējiet, lai koncentrētu šķidrumu mēģenes apakšā.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Pievienojiet 375 ul 2x buferšķīduma SARS-Cov-2 maisījumam ((liofilizētam), lai sagatavotu reakcijas maisījumu. Rūpīgi samaisiet ar pipeti un pēc tam īsi centrifugējiet. （Kad reakcijas maisījums ir sagatavots, ieteicams uzglabāt -20 ℃ temperatūrā. ilgstoša uzglabāšana.)
(2) Sagatavojiet tīru 0,2 ml PCR oktālo mēģeni un atzīmējiet to ar 15 μL reakcijas maisījuma katrā iedobē.
(3) Pievienojiet 15 μL attīrīta nukleīnskābes šķīduma, pozitīvo un negatīvo kontroli un uzmanīgi nosedziet oktālās mēģenes vāciņu.
(4) Labi samaisiet, apgriežot otrādi, un ātri centrifugējiet, lai koncentrētu šķidrumu mēģenes apakšā.
3. PCR amplification (Informāciju par darbības iestatījumiem skatiet instrumenta rokasgrāmatā.）
3. 1. Ievietojiet PCR 8 cauruli fluorescējošā PCR instrumenta parauga kamerā un iestatiet pārbaudāmo paraugu, pozitīvo un negatīvo kontroli atbilstoši iekraušanas secībai.
3.2. Fluorescences noteikšanas kanāls:
(1) ORF1ab gēns izvēlas FAM noteikšanas kanālu (Reportieris: FAM, Quencher: Nav).
(2) N gēns izvēlas VIC noteikšanas kanālu (Reportieris: VIC, Quencher: Nav).
(3) Iekšējā standarta gēns izvēlas CY5 noteikšanas kanālu (ziņotājs: CY5, dzēsējs: nav).
(4) Pasīvā atsauce ir iestatīta uz ROX.
3.3 PCR programmas parametru iestatīšana:
| Solis | Temperatūra (℃) | Laiks | Ciklu skaits | |
| 1 | Reversās transkripcijas reakcija | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Taq enzīmu aktivizēšana | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Taq enzīmu aktivizēšana | 93 | 10 s | 43 |
| Atlaidināšanas pagarinājums un fluorescences iegūšana | 55 | 30 s | ||
Pēc iestatīšanas saglabājiet failu un palaidiet reakcijas programmu.
4.Results analysis
Pēc programmas beigām rezultāti tiek automātiski saglabāti un tiek analizēta pastiprināšanas līkne. Pastiprināšanas līkne ir iestatīta uz instrumenta noklusējuma slieksni.
【Explanation of test results 】
1. Nosakiet eksperimenta derīgumu: pozitīvās kontroles FAM, VIC kanālam jābūt ar tipisku pastiprināšanas līkni, un Ct vērtība parasti ir mazāka par 34, taču tā var svārstīties dažādu instrumentu atšķirīgo sliekšņa iestatījumu dēļ. Negatīvās kontroles FAM, VIC kanālam jābūt nepastiprinātam Ct. Ir panākta vienošanās, ka iepriekš minētās prasības ir jāizpilda vienlaikus, pretējā gadījumā šis tests ir nederīgs.
2. Rezultāta spriedums
| FAM/VIC kanāls | Sprieduma rezultāts |
| Ct＜37 | Parauga tests ir pozitīvs |
| 37≤Ct＜40 | Pastiprināšanas līkne ir S-veida, un aizdomīgie paraugi ir atkārtoti jāpārbauda; ja atkārtotās pārbaudes rezultāti ir konsekventi, tas tiek vērtēts kā pozitīvs, pretējā gadījumā tas ir negatīvs |
| Ct≥40 vai nav pastiprinājuma | Parauga tests ir negatīvs (vai zem komplekta noteikšanas apakšējās robežas) |
Piezīme: (1) Ja gan FAM kanāls, gan VIC kanāls ir pozitīvi vienlaicīgi, SARS-Cov-2 tiek noteikts kā pozitīvs.
(2) Ja FAM kanāls vai VIC kanāls ir pozitīvs, bet otrs kanāls ir negatīvs, tests ir jāatkārto. Ja tajā pašā laikā tas būs pozitīvs, tas tiks novērtēts kā SARS-Cov-2 pozitīvs, pretējā gadījumā tas tiks novērtēts kā SARS-Cov-2 negatīvs.
Saistītie produkti
-
COVID-19 IgM/IgG antivielu noteikšanas komplekts
COVID-19 IgM/IgG antivielu noteikšanas komplekts (koloidālā zelta imūnhromatogrāfijas metode) produkta rokasgrāmata 【PRODUKTA NOSAUKUMS】COVID-19 IgM/IgG antivielu noteikšanas komplekts (koloidālā zelta imūnhromatogrāfijas metode) 】Pārbaudes 1. IEPAKOJUMS, 1. 【 KOPSAVILKUMS】 Jaunie koronavīrusi pieder pie β ģints. COVID-19 ir akūta elpceļu infekcijas slimība. Cilvēki parasti ir uzņēmīgi. Pašlaik ar jauno koronavīrusu inficētie pacienti ir galvenais avots...
-
Nukleīnskābju ekstrakcijas vai attīrīšanas komplekts
Nukleīnskābju ekstrakcijas vai attīrīšanas komplekts vai uzglabā -20 ℃. Paraugs ir jātransportē, izmantojot 0℃ saritināšanu. Ievads Nukleīnskābes ekstrakcijas vai attīrīšanas komplekts (magnētisko lodīšu metode) ir paredzēts automatizētai RNS un DNS attīrīšanai no ķermeņa šķidrumiem (piemēram, tamponiem, plazmas, seruma), izmantojot automatizētus nukleīnskābju ekstrakcijas instrumentus. Magnētisko daļiņu tehnoloģija nodrošina augstas kvalitātes DNS/RNS, kas ir piemērota...
-
SARS-CoV-2 antigēnu pārbaudes komplekts (Imūnhromatogr...
SARS-CoV-2 antigēnu testu komplekts (Imunohromatogrāfijas metode) Produkta rokasgrāmata 【PRODUKTA NOSAUKUMS】SARS-CoV-2 antigēna testa komplekts (Imūnhromatogrāfijas metode) 【IEPAKOJUMA SPECIFIKĀCIJAS】 1 TestABesusus 【βSTRACT pieder pie coronavirus. COVID-19 ir akūta elpceļu infekcijas slimība. Cilvēki parasti ir uzņēmīgi. Šobrīd ar jauno koronavīrusu inficētie pacienti ir galvenie...
-
SARS-CoV-2 antigēnu pārbaudes komplekts
SARS-CoV-2 antigēnu testu komplekts (imūnhromatogrāfijas metode) Produkta rokasgrāmata 【PRODUKTA NOSAUKUMS】SARS-CoV-2 antigēna testa komplekts (Imūnhromatogrāfijas metode) 【IEPAKOJUMA SPECIFIKĀCIJAS】 1 Tests/Kit/Kits0S1,25Testests ,0KCTITests 】 jaunie koronavīrusi pieder pie β ģints. COVID-19 ir akūta elpceļu infekcijas slimība. Cilvēki parasti ir uzņēmīgi. Pašlaik ar jauno koronavīrusu inficētie pacienti ir galvenais infekcijas avots; asimptomātiski inficēti cilvēki...